丙型肝炎病毒特异性核酶细胞内切割活性的研究

摘要: 设计合成针对丙型肝炎病毒(HCV)核心区基因(第384-386nt)的锤头状核酶(Ribozyme,Rz),从丙型肝炎病人的血清中提取HCVRNA,经RT-PCR扩增HCV基因片段(412bp),作为核酶的靶序列,将核酶基因和HCV靶基因片段分别克隆人反转录病毒载体pLXN中构建重组载体,并用电击法分别转入包装细胞PA317中,将上述两种转细胞释放到培养液中的含Rz的假病毒颗粒和含HCV靶基因的假病毒颗粒混合后,共同感染空白的PA317细胞,被感染细胞维持液的RT-PCR结果表明,无HCV靶基因产物即无靶基因的假病毒颗粒释放至维持液中,证明Rz在细胞内有切割HCV靶RNA的活性。